mirna检测费用

很多朋友对于mirna检测费用和mirna多少钱不太懂，今天就由小编来为大家分享，希望可以帮助到大家，下面一起来看看吧！

文章目录：

• 1、miRNA专家谈之三:如何上调或下调特定的miRNA
• 2、哪些的miRNA提取试剂盒和逆转录试剂盒比较好
• 3、如何寻找与鉴定miRNA的靶基因?
• 4、如何筛选目的基因的miRNA

miRNA专家谈之三:如何上调或下调特定的miRNA

1、我选用的载体是否合适，miRNA如果已有慢病的表达载体（商品），是否可以直接利用，还是需要重新做？PGL-3 control是否可以？有无合适的位点供克隆，只发现XbaI。

2、剪切降解：miRNA结合到靶基因的mRNA上形成RNA复合物，这个复合物可以引导靶基因mRNA在特定位点发生剪切，从而导致靶基因mRNA的降解。

3、目前常见的miRNA检测方法包括 Northern Blot、微阵列芯片、微球、实时荧光定量PCR等技术，然而由于以下原因而各具缺陷。首先，由于miRNA本身碱基数过少，使得探针碱基序列的选择受限。

哪些的miRNA提取试剂盒和逆转录试剂盒比较好

1、加尾法是采用加A酶先对mirna进行加尾，然后再用带oligodt的引物反转录，他的反转录引物是通用的，一次反转录可以获得所有miRNA的cdna，效率高。

2、Takala好点。首先，不否认它比大多数国产的试剂盒做得好，提取的纯度、方便度和量，都还很不错。赛默飞并不生产试剂盒。

3、作为国产品牌的试剂盒，天根做的还不错，如果是学校实验室用，可以试试，如果是研究所类机构，建议用国外的，如sigma，omega，axygen等。

4、逆转录一般用罗氏的，目前天根的全式金的也挺好用，还方便。如果是用转录出的cDNA做那跟平时就一样了。

5、看你要提什么RNA了，如果是总RNA建议用TRIZOL法，反转录用一步法或两步法反转录试剂盒，如果你要做双链cDNA，接下来还要进行第二条链合成，有双链cDNA合成试剂盒，也有这两步都包括的试剂盒。

6、这两个都各自有抽提miRNA的试剂盒、逆转录试剂盒、引物设计、实时荧光定量PCR 的全套产品。设计原理稍微有所不同。个人印象Exiqon在血浆的miR抽提方面比较有经验，而Life Tech在定量PCR方面的Tagman技术比较老牌知名。

如何寻找与鉴定miRNA的靶基因?

利用各种生物信息学方法和实验方法来寻找miRNA的靶基因。，鉴定miRNA靶基因的最常用方法是依赖计算机算法，如TargetScan、MiRanda和PicTar。它们预测miRNA种子区的结合。

首先，构建荧光素酶表达载体，将希望鉴定的miRNA靶基因的3’UTR插入荧光素酶基因的3’UTR中，然后将构建好的重组载体转染到细胞中，并改变miRNA的表达水平，最后检测荧光素酶的表达情况，以分析3’UTR中是否含有miRNA的靶位点。

用一些预测，例如TargetScan、miRDB等。可以同时使用几个预测，挑选出重叠的靶标，进行靶标验证。一般预测的靶标都是3UTR区有结合位点，因此通常使用双荧光素酶报告实验来证明是否真的是直接靶标。

如何筛选目的基因的miRNA

利用各种生物信息学方法和实验方法来寻找miRNA的靶基因。，鉴定miRNA靶基因的最常用方法是依赖计算机算法，如TargetScan、MiRanda和PicTar。它们预测miRNA种子区的结合。

miRNA靶位点鉴定：目前最为常用的miRNA靶位点鉴定方法是荧光素酶报告基因法。

是否是已知的miRNA？如果是已知的miRNA，我建议你到Sanger检索一下序列，然后合成相应探针进行NorthernBlot确证，或者利用RT-PCR克隆相应片段进行测序，等等，具体用什么检测方法要取决于你的课题需要。

检测外泌体中的miRNA通常需要经过以下步骤：外泌体提取：首先，从细胞培养上清液、血浆、尿液等样品中提取外泌体。可以使用商用的外泌体提取试剂盒，按照厂家提供的操作说明进行提取。

-UTR，通过抑制翻译起始来调控基因表达。据此可以设计，你过表达这个miRNA，那么它的靶基因应该是mRNA不怎么变，但翻译中mRNA明显下调。符合这一特征的即很有可能是miRNA的直接靶点。再结合断，一般就可以很精准了。

选取什么细胞系进行实验，是靶基因和miRNA内源表达高的，还是低的。

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